以每次制備5個(gè)疫苗（偶聯(lián)OV）為例：

1. 稱(chēng)取0.3g OV，溶解于5ml 0.1M Na₂CO₃。徹底溶解后于12000rpm離心2min，轉(zhuǎn)上清到潔凈的50mL離心管，加入1mL冷丙酮，冷卻到4度后備用。

2. 稱(chēng)取75 mg NHS-活化碘乙酸酯 （考慮雜質(zhì)，用75mg） ，加入300μL的 DMF（富馬酸二甲脂），徹底溶解后于10000rpm離心1min，取上清備用，同時(shí)留沉淀備用。

3. 邊渦旋邊逐滴將步驟2的上清液慢慢滴入步驟1的上清液（OV液），轉(zhuǎn)速不能過(guò)大，避免起氣泡。

4. 在步驟2的沉淀中再次加入100μL的DMF，重懸后于10000rpm離心1min。取上清重復(fù)3一次。

5. 將步驟4得到的OV-碘乙酸混合物（pH>9）放到4度，避光孵育15分鐘 （每隔5分鐘搖晃一次）。

6. 離心后，OV-碘乙酸混合物(6 mL)過(guò)脫鹽柱（40 mL），方法為：將OV-碘乙酸混合物（大概6mL）均勻滴加到脫鹽柱表面，同時(shí)計(jì)量流出液空量。補(bǔ)加PBS維持液面。棄掉前面15mL空量體積，收集10mL濾液（OV大約25mg/mL），按2mL/管分裝備用?！咀⒁饷看尉璎F(xiàn)配現(xiàn)用】

7. 按1 mL比5mg多肽比例，在5管多肽中各加入約1mL【0.1M Na₂CO₃+10mM EDTA】，混勻溶解。

8. 將步驟7準(zhǔn)備好的多肽，按每種多肽（5mg/mL）加入到步驟6分裝好的2mL脫鹽OV-碘乙酸混合物，混勻。【測(cè)PH,PH必須大于7;注意步驟7和8要一管一管的做?！?

9. 搖床上低速搖動(dòng)1小時(shí)后，加入4倍體積（12mL）的冰凍丙酮，4度沉淀蛋白質(zhì)30分鐘。

10. 6000rpm離心10分鐘，去上清（另外保留，備ELISA檢測(cè)用），沉淀加入50mL蒸餾水，將抗原稀釋成1mg/mL（沉淀部份也是疫苗）。分裝凍存?zhèn)溆茫ㄖ苽渥⑸淝白⒁獍殉恋硪舶趦?nèi)）。