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免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(Western blot)，它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。Western blot是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡(Western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡(Western blot)常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。
藍(lán)光生物為您提供全套免疫印跡(Western blot)技術(shù)服務(wù)和相關(guān)的試劑耗材。主要實(shí)驗(yàn)步驟如下：
1. 蛋白質(zhì)抽提
(1). 組織樣品：取適量（250~500mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品，加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑），勻漿后抽提總蛋白（或核蛋白）。
(2). 細(xì)胞樣品：每份樣品取1×106～1×107細(xì)胞，PBS清洗細(xì)胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑）抽提總蛋白（或核蛋白）。
2. 蛋白質(zhì)定量：按BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒操作說明操作，測(cè)定樣品濃度。
3. 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE):將準(zhǔn)備好的樣品液和預(yù)染蛋白marker分別上樣，標(biāo)準(zhǔn)加進(jìn)第一個(gè)孔中，電泳分離蛋白。
4. 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF/NC膜：按六一蛋白轉(zhuǎn)移裝置說明組裝濾紙凝膠纖維素夾層，設(shè)定恒流轉(zhuǎn)膜。
5. Western blot膜的封閉和抗體孵育
(1) 膜在5％脫脂奶粉溶液或3% BSA溶液中室溫孵育2小時(shí)以封閉膜上的非特異結(jié)合。
(2) 封閉過的膜漂洗后，加入一抗室溫孵育2小時(shí)，使抗體與目的蛋白結(jié)合。
(3) 漂洗后，加入配對(duì)HRP標(biāo)記的二抗結(jié)合一抗，室溫孵育膜1小時(shí)。
6. Western blot結(jié)果檢測(cè)：化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，膜與化學(xué)發(fā)光底物孵育，經(jīng)X膠片曝光顯影。圖片掃描保存為電腦文件，并用BANDSCAN分析軟件將圖片上每個(gè)特異條帶灰度值的數(shù)字化。
7. 提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告：包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法及免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)數(shù)據(jù)。
8. 服務(wù)費(fèi)用：服務(wù)內(nèi)容包含蛋白抽提、蛋白濃度測(cè)試以及免疫印跡測(cè)試【每張膜上做一種目的蛋白。每張膜上可以做8個(gè)樣品（不足8個(gè)按8個(gè)計(jì)算），測(cè)試目的蛋白和內(nèi)參抗體?！?，包含其他試劑耗材但不包括抗體費(fèi)用，每張膜的費(fèi)用是：1000.00元。時(shí)間：1-2周。
